Diabetologia：激活但功能损害的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出新呼吸道自身特异性到显现出新1同型乳癌外科病患的的发展率在成人时期就有很好的叙述，多个呼吸道自身特异性阳性的成人早先有70%在血清转换后10年内入院乳癌，而随访15年的成人这一%-上升到84%。值得注意，占外科1同型乳癌一半以上的同型1同型乳癌的肺癌的系统还没有得到更进一步的深入研究。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1同型乳癌的的发展：个体在显现出新多种呼吸道自身特异性时转回第1前期，显现出新血压反常时转回第2前期，显现出新病患时转回第3前期。一些多发呼吸道自身特异性阳性的个体，在1期和2期，的发展较更慢，并发展为肺癌的1同型乳癌。我们早先叙述了三组成员在首次检验到多种呼吸道自身特异性检验后有数10年无乳癌的想像中更慢的发展者，这组成员病患次数多于，但构造非常具体。随后，我们见到呼吸道自身特异性特异性CD8+T细胞内反应会在的发展较更慢的病患早先也就是说不共存，但在早先肺癌和经常性共存的乳癌病患早先很不够容易检验到。这也许证明，与的发展病患相对，这些病患诱发反应会的通气减弱。

早期深入研究证明，尽管通气性T细胞内(Treg)数量正常，但乳癌病患共存一些特性弱点，其早先除此以外对IL-2的反应会灵活性减缓。此外，乳癌病患早先的振荡CD4+T细胞内也许对通气不够具抵抗性，展示出为振荡T细胞内的依赖性移向，纯净归因于的Treg和体外归因于的诱导Treg，以及特异性历程的CD4+T细胞内早先IL-2反应会移向。本深入研究的目的是叙述了CD4+通气性T细胞内(Treg)在群集想像中较更慢的发展者早先的构造，他们的中年人为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX深入研究是一项以人群为基础的横向深入研究，在21岁以下确诊的病患亲属早先检查1同型乳癌的危险原因。我们早先叙述了经常性较更慢的发展者的构造，他们保持多重呼吸道自身特异性阳性超过10年，但没有显现出新乳癌的外科病患，更慢性或非同步进行性诱发。随后，10名继续保持无乳癌并愿意提供大量血液检验的较更慢的发展者纳入T和B细胞内特性分析方法。在以外的深入研究早先，8名更慢的发展者(SP组成员)，早先位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的呼吸道自身特异性阳性。所有的旁观者都所处1同型乳癌的发展的1期，尽管一些人随后耗尽了呼吸道自身特异性对某些特异性的阳性反应会，然而，一名病患已经所处2期有数6年，但没有显现出新外科病患，一名病患被诊断为乳癌，该受试者72岁，在采集检验检验时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方法早先对该酪氨酸同步进行了基本上评核。分离外周血单个连锁反应会细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内精和T细胞内依赖性试验评核酪氨酸早先Treg的高频率、表同型和特性。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类断定、表征和回归)同步进行无监督聚类分析方法，评核Treg表同型。

结果：与身体健康酪氨酸相对，来自更慢的发展体的失忆CD4+T细胞内的监督聚类证明，激能活的失忆CD4+ Treg高频率上升，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c升高的病患与的发展较更慢者和比如说的对照组成员相对，Treg五音有所不同。特性分析方法证明，与身体健康酪氨酸相对，来自较更慢的发展体的Treg内源性的CD4+振荡T细胞内依赖性轻微受损。展示出为对振荡CD4+T细胞内CD25和CD134解读的依赖性上升。

由此可知1 深入的表同型分析方法证明，CD4+Treg亚同型在更慢的发展链表早先上升。由FlowSOM聚合的Treg四楼，聚集在来自所有酪氨酸的能活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标明物解读断定出新10个元簇:失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标明聚合的10个元簇的MST。每个路由代表一个一个大(100个一个大)，大得多的元一个大(10个元一个大)在路由组成员周围上色。每个路由早先的糕由此可知坚称单个标明的解读级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以证明整体标明解读。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)聚合由此可知，以及FlowSOM辨别的每个元簇的裂口。(e-l)值得注意同位素为每个metacluster罐该线由此可知(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞内(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞内(l)。紫色圆点代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 应用于CITRUS的预测模同型证实，Treg高频率的上升是的发展较更慢的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析方法(g-k)不够为SP旁观者和比如说的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞内上的不同。(a)子代CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读同步进行分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(横纹)和SP(黑斑)组成员以及酪氨酸SP 606(紫色)早先CD25+ cd127的高频率摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的罐该线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度可视，箭头突出新的簇被辨别为SP和HD链表两者之间的不同。(j)罐该线由此可知证明了在SP(黑斑)和HD(灰点)组成员早先，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的值得注意同位素(%-)。(k)缩放证明每个簇的表同型(粉红色)和Treg标明值得注意解读与背景解读(深蓝色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇早先标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对表示法秩检验

由此可知3 与身体健康献血者相对，的发展较更慢者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T细胞内元簇(失忆T细胞内_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞内;HLA-DR + GITR +失忆T细胞内;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的解读热由此可知(sp606不除此以外在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇早先所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读串联，证明缩放(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon配对表示法秩和检验，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸除此以外，p< 0.05(深蓝色)酪氨酸SP 606和比如说的HD不除此以外在测试早先。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs早先GITR解读，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(紫色)串联，证明缩放(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对表示法秩检验

由此可知4 来自较更慢的发展的CD4+ treg细胞内控制振荡CD4+T细胞内的灵活性减缓。SP组成员用深蓝色的该线和圆点坚称，HD组成员用黑色的该线和圆点坚称，紫色的该线/圆点坚称酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按推论的%-滴定。用抗CD3 /28微珠能酪氨酸细胞内，培训3当晚同步进行流式细胞内精检验。(a-d)与CD4+；也者值得注意应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培训。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE依赖性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性%-。应用于阳性对照(激能活的号召细胞内不含treg)量化依赖性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重不够为测试

由此可知5 振荡CD4+T细胞内对较更慢的发展的T细胞内能酪氨酸的依赖性不够敏感。SP组成员用深蓝色的该线和圆点坚称，HD组成员用黑色的该线和圆点坚称，紫色的该线/圆点坚称酪氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按推论的%-滴定。用抗CD3 /28微珠能酪氨酸细胞内，培训3当晚同步进行流式细胞内精(CD25反染)和细胞内因子分析方法。HD Treg与HD、SP或sp606；也者主导培训。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训早先的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方法。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重不够为测试

论点：我们证明了的论点是，来自较更慢的发展子的能酪氨酸失忆CD4+Treg在GITR解读早先得到了扩展和丰富，强调了进一步深入研究Treg在1同型乳癌风险个体早先的异质性的合理性。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28